Clinical Significance of an Alloantibody against the Kell Blood Group Glycoprotein

Summary

Tło: Osoby z grupą Kell null (K0) mogą wytwarzać anty-Ku, przeciwciało przeciwko wielu epitopom glikoproteiny Kell, po transfuzji i/lub ciąży. Ponieważ uczuleni pacjenci K0 są rzadcy, niewiele wiadomo o klinicznym znaczeniu anty-Ku, a w szczególności o jego związku z chorobą hemolityczną płodu i noworodka. Opis przypadku: W niniejszej pracy opisano przypadek noworodkowej hiperbilirubinemii spowodowanej immunologicznym niszczeniem erytrocytów przez alloprzeciwciało skierowane przeciwko glikoproteinie Kell. Badania serologiczne i molekularne zidentyfikowały alloprzeciwciało anty-Ku w surowicy matki. Stwierdzono, że homozygotyczna mutacja punktowa IVS3 + 1g>a (allel KEL*02N.06) jest odpowiedzialna za brak ekspresji antygenu Kell w krwinkach czerwonych matki i późniejszą alloimmunizację po poprzedniej ciąży. Mimo że w większości przypadków przeciwciała Kell mają ciężki przebieg kliniczny i mogą powodować supresję erytropoezy, w naszym przypadku u noworodka wystąpiła umiarkowana niedokrwistość i hiperbilirubinemia, którą skutecznie leczono fototerapią, nie wymagając transfuzji wymiennej. Badania serologiczne i molekularne przeprowadzone u członków rodziny probantki pozwoliły na udzielenie im odpowiednich porad dotyczących alloimmunizacji po transfuzji i/lub ciąży. Wnioski: Opisany przypadek poszerza zrozumienie klinicznego znaczenia alloprzeciwciał przeciwko antygenom grupy krwi Kell.

© 2016 S. Karger GmbH, Freiburg

Wprowadzenie

Układ Kell (ISBT 006) jest jedną z najważniejszych grup krwi w medycynie transfuzjologicznej i położniczej. Jest wysoce immunogenny, a przeciwciała Kell są uważane za istotne klinicznie. Układ grupowy krwi Kell obejmuje 35 antygenów, z których najważniejsze są K/k (KEL1/KEL2), Kpa/Kpb (KEL3/KEL4) i Jsa/Jsb (KEL6/KEL7). Ekspresja antygenów Kell jest determinowana przez różne allele genu KEL, który jest zorganizowany w 19 eksonów. Polimorfizmy pojedynczych nukleotydów są najczęstszą przyczyną różnych fenotypów Kell. Antygeny Kell są wyrażane na glikoproteinie typu II Kell, która jednokrotnie rozpościera się na błonie komórkowej krwinek czerwonych (RBC) i jest połączona pojedynczym wiązaniem disulfidowym z białkiem XK, integralnym polipeptydem błonowym, który wyraża antygen grupy krwi Kx (XK1). Brak białka XK prowadzi do zespołu Mc Leoda, który charakteryzuje się nieprawidłowościami nerwowo-mięśniowymi, łagodną hemolizą i akantocytozą krwinek czerwonych ze znacznie zmniejszoną ilością białka Kell i wszystkich jego antygenów (fenotyp Mc Leoda) .

Zmiany nukleotydowe zachodzące w genie KEL mogą prowadzić do powstania cichych alleli (allele K0) odpowiedzialnych za brak ekspresji antygenu Kell, tzw. fenotypu Kell null (fenotyp K₀). Obecnie poznano co najmniej 37 różnych alleli K0 u niewielkiej liczby osób, które w homozygotyczności lub heterozygotyczności złożonej znoszą ekspresję antygenu Kell. Ponadto, kilka zmian nukleotydowych wpływających na gen KEL prowadzi do obniżenia lub osłabienia antygenów Kell, co określa się jako fenotyp Kmod .

Brak glikoproteiny Kell u osób K₀ nie powoduje rozpoznawalnej choroby; jednak mogą one wytwarzać anty-Ku (anty-KEL5), przeciwciało przeciwko wielu epitopom w całym polipeptydzie, po transfuzji i / lub ciąży. Ponieważ uczuleni na K₀ pacjenci są rzadkością, niewiele wiadomo na temat klinicznego znaczenia anty-Ku, a w szczególności na temat jego związku z chorobą hemolityczną płodu i noworodka (HDFN). Podczas gdy niektórzy autorzy stwierdzili, że anty-Ku jest związane z ciężką niedokrwistością okołoporodową, inni nie znaleźli dowodów klinicznych na występowanie tej choroby u niemowląt. Z drugiej strony, przeciwciała anty-Ku-like zostały opisane u osób, których RBC są sklasyfikowane jako Kmod. W poniższym opisie przypadku, opisujemy znaczenie kliniczne przeciwciała anty-Ku znalezionego u matki K₀.

Raport przypadku

21-letnia, gravida 2, para 1, Argentynka, grupa krwi A RhD-dodatnia została przyjęta do szpitala w trakcie porodu, w 40 tygodniu niemonitorowanej ciąży. Kobieta nie miała wcześniejszych poronień ani transfuzji i urodziła dziecko z grupą krwi A RhD-dodatnią, które ważyło 3,320 kg, miało wyraźną hiperbilirubinemię (bilirubina całkowita 6,32 mg/dl) i dodatni (4+) bezpośredni test antyglobulinowy (DAT). Noworodek był natychmiast leczony fototerapią. Wartości bilirubiny całkowitej stopniowo wzrastały. Nie znaleziono zgodnych RBC z surowicą matki, które można by przetoczyć do transfuzji wymiennej. Przygotowano płukane koncentraty krwinek matczynych, ale nie wykorzystano ich, ponieważ w 3. dobie życia bilirubina całkowita zaczęła się stopniowo obniżać. Tabela 1 zawiera podsumowanie rozwoju i wyników badań laboratoryjnych noworodka podczas hospitalizacji.

Próbka krwi obwodowej od probanta została pobrana od noworodka. Próbka krwi obwodowej probanta została wysłana do naszego laboratorium referencyjnego z powodu obecności alloprzeciwciała IgG RBC, które reagowało (3+) ze wszystkimi panelowymi RBC w fazie antyglobuliny ludzkiej w roztworze o niskiej sile jonowej oraz z RBC modyfikowanymi papainą. Surowica matki nie była reaktywna podczas badania z RBC poddanymi działaniu ditiothreitolu lub EDTA/kwasu glicynowego. Miano przeciwciał przeciwko krwinkom męża zgodnym w układzie ABO wynosiło 128. Rozszerzone typowanie erytrocytów wykonano techniką probówkową i stwierdzono następujący fenotyp: C+ c+ E- e+; M+ N- S- s+; Fy(a+ b+); Jk(a+ b-); Lu(a- b+); Le(a- b+); K- k-; Kp(a- b-); Js(a- b-). RBC pacjentki wykazały ujemną typologię dla wszystkich badanych antygenów grupy krwi Kell. DAT i autokontrola były ujemne zarówno w konwencjonalnej metodzie probówkowej, jak i w teście żelowym. Łącznie wyniki te sugerowały potencjalny fenotyp K₀ z obecnością alloprzeciwciała anty-Ku. Czasami trudno jest serologicznie odróżnić fenotyp K₀ od fenotypu Kmod. Wykrycie antygenów Kell w dużym stopniu zależy od awidności stosowanych odczynników, dlatego czasami trudno jest ustalić granicę między słabo dodatnią aglutynacją a ujemną. Biorąc to pod uwagę, możliwość wystąpienia fenotypu Kmod z przeciwciałem anty-Ku like nie może być lekceważona do czasu przeprowadzenia badań molekularnych.

Genotypowanie KEL zostało przeprowadzone w genomowym DNA matki przy użyciu strategii polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) i wykazało genotypy KEL*02/02, KEL*04/04 i KEL*07/07. Ze względu na rozbieżności między wynikami serologicznymi i molekularnymi, każdy z 19 eksonów genu KEL i granice intronów-eksonów zostały zsekwencjonowane metodą dideoksydacji Sangera. Chromatogramy wykazały homozygotyczną substytucję guaniny na adeninę w pierwszym nukleotydzie intronu 3 (IVS3 + 1g>a) zmieniającą konserwowaną sekwencję gt w miejscu splotu 5ʹ na at. Zdarzenie to powoduje nieprawidłowe splicing RNA, zmieniając ramkę odczytu i wprowadzając przedwczesny kodon stop, który uniemożliwia ekspresję glikoproteiny Kell na błonie RBC. Dane sekwencjonowania dostarczone przez Exome Aggregation Consortium , uzyskane od 60 706 niespokrewnionych osób o różnym pochodzeniu etnicznym wykazały, że mutacja IVS3 + 1g>a (akcesja dbSNP: rs369569464) ma częstość 8,29 × 10-5 i została znaleziona w populacjach europejskich (niefińskich), europejskich (fińskich), latynoskich i południowoazjatyckich. Wariant IVS3 + 1a, określany przez International Society of Blood Transfusion jako allel KEL*02N.06, jest jednym z najczęstszych genetycznych podstaw niezwykle rzadkiego fenotypu K₀ . Analiza molekularna potwierdziła, że probantka miała fenotyp K₀ i wysoce sugeruje się, że swoistość alloprzeciwciała stwierdzonego w surowicy pacjentki była efektywnie anty-Ku.

Członkowie rodziny probantki zostali zbadani metodami serologicznymi i molekularnymi w celu zapewnienia im właściwego doradztwa w zakresie alloimmunizacji po transfuzji i/lub ciąży. Opracowano strategię PCR z primerem specyficznym dla sekwencji (SSP) w celu wykrycia mutacji znalezionej u probanta. Wykonano dwa oddzielne PCR z użyciem primera forward (ATCTTTCACCTCTTGTTCCTCCC) komplementarnego do sekwencji konsensusowej genu KEL sparowanego z primerami reverse zawierającymi w swoich 3ʹ końcach (pozycja IVS3 + 1) polimorficzne nukleotydy C (GGGGTCTGGATCTTGCTTAC) w celu annealii z G w allelu typu KELwild lub T (GGGGTCTGGATCTTGCTTAT) w celu annealii z A w allelu KEL*02N.06 w każdej reakcji. Do ustalenia optymalnych warunków PCR wykorzystano próbki DNA pochodzące od pacjenta (genotyp KEL*02N.06/KEL*02N.06) i osoby zdrowej (genotyp KEL*01/KEL*02). Amplifikacji dokonywano z około 0,5 μg genomowego DNA w końcowej objętości 10 μl zawierającej 0,4 μmol/l każdego primera (z wyjątkiem primerów użytych do wewnętrznych kontroli pozytywnych, które miały stężenie 0,04 μmol/l), 0,2 mmol/l każdego dNTP, 2 mmol/l MgCl2 i 1 U polimerazy Taq DNA w odpowiednim buforze. PCR rozpoczynano jednym cyklem denaturacji w 94 °C przez 5 min, a kończono jednym cyklem 10 min w 72 °C do całkowitego wydłużenia. Parametry cykli wynosiły 30 cykli po 40 s w 94 °C, 40 s w 67 °C dla annealingu i 40 s w 72 °C dla przedłużenia. We wszystkich reakcjach PCR para primerów, które amplifikowały sekwencję konsensusową ludzkiego genu hormonu wzrostu była używana jako wewnętrzna kontrola pozytywna. Produkty PCR (435 bp dla wewnętrznej kontroli pozytywnej i 192 bp dla produktów specyficznych) analizowano metodą elektroforezy na 2% żelach agarozowych. Strategia ta pozwala na wykrycie allelu KEL*02N.06 w podwójnej lub pojedynczej dawce. Wyniki badań serologicznych i PCR-SSP (ryc. 1) wykazały, że siedmiu członków rodziny (matka, ojciec, 2 siostry, 1 brat i 2 synów) wykazuje ekspresję antygenów k, Kpb i Jsb oraz jest nosicielami pojedynczej dawki allelu KEL*02N.06.

Kontakty z autorami

Szczegóły artykułu/publikacji

Copyright / Drug Dosage / Disclaimer

Copyright: Wszelkie prawa zastrzeżone. Żadna część tej publikacji nie może być tłumaczona na inne języki, reprodukowana lub wykorzystywana w jakiejkolwiek formie lub za pomocą jakichkolwiek środków, elektronicznych lub mechanicznych, w tym fotokopiowanie, nagrywanie, mikrokopiowanie lub za pomocą jakiegokolwiek systemu przechowywania i wyszukiwania informacji, bez pisemnej zgody wydawcy.
Dawkowanie leków: Autorzy i wydawca dołożyli wszelkich starań, aby zapewnić, że wybór leku i dawkowanie określone w niniejszym tekście są zgodne z aktualnymi zaleceniami i praktyką w momencie publikacji. Jednak ze względu na trwające badania, zmiany w przepisach rządowych oraz ciągły napływ informacji dotyczących terapii lekowej i reakcji na leki, zaleca się czytelnikowi sprawdzenie ulotki dołączonej do opakowania każdego leku pod kątem zmian we wskazaniach i dawkowaniu oraz dodatkowych ostrzeżeń i środków ostrożności. Jest to szczególnie ważne, gdy zalecany środek jest nowym i/lub rzadko stosowanym lekiem.
Zrzeczenie się odpowiedzialności: Stwierdzenia, opinie i dane zawarte w tej publikacji są wyłącznie opiniami poszczególnych autorów i współpracowników, a nie wydawców i redaktora(ów). Pojawienie się reklam lub/i odniesień do produktów w publikacji nie stanowi gwarancji, poparcia lub zatwierdzenia reklamowanych produktów lub usług lub ich skuteczności, jakości lub bezpieczeństwa. Wydawca i redaktor(y) zrzekają się odpowiedzialności za jakiekolwiek obrażenia osób lub mienia wynikające z jakichkolwiek pomysłów, metod, instrukcji lub produktów, o których mowa w treści lub reklamach.