Procesamiento de muestras clínicas
Cuando se recogen muestras de pacientes para el aislamiento e identificación de bacterias anaerobias asociadas a infecciones, se deben tomar precauciones para excluir el aire (Fig. 17-3). Los materiales para el cultivo de anaerobios se obtienen mejor con una aguja y una jeringa. A menos que la muestra pueda enviarse al laboratorio inmediatamente, se coloca en un tubo de transporte anaeróbico que contenga dióxido de carbono o nitrógeno sin oxígeno. La muestra se inyecta a través del tapón de goma del tubo de transporte y permanece en el entorno anaeróbico del tubo hasta que se procesa en el laboratorio de bacteriología. Si la muestra se recoge con un hisopo, sólo se utiliza un sistema especial de transporte de hisopos anaeróbicos disponible en el mercado.
Figura 17-3
Aislamiento e identificación de anaerobios.
Los especímenes deben estar libres de bacterias contaminantes. El material procedente de lugares normalmente estériles, como la sangre, el líquido cefalorraquídeo o el líquido pleural, no plantea ningún problema siempre que se tomen las precauciones habituales para descontaminar adecuadamente la piel antes de pincharla para obtener la muestra. Las muestras fecales, de esputo o de secreciones vaginales no pueden cultivarse de forma rutinaria para detectar anaerobios patógenos porque normalmente contienen otros organismos anaerobios. En estos casos deben obtenerse aspirados de abscesos o de los lugares específicos de las infecciones para evitar la contaminación indebida con componentes de la flora autóctona.
Aunque existen varias técnicas para mantener un entorno sin oxígeno durante el procesamiento de las muestras para el cultivo de anaerobios, el frasco de anaerobios es el más común. Se trata de un frasco de vidrio o plástico de tamaño medio con una tapa bien ajustada que contiene partículas de alúmina recubiertas de paladio, que sirven de catalizador. Se puede preparar por dos métodos. El más sencillo utiliza un sobre generador de hidrógeno y dióxido de carbono disponible en el mercado (GasPak) que se coloca en el tarro junto con las placas de cultivo. El generador se activa con agua. El oxígeno dentro del frasco y el hidrógeno que se genera se convierten en agua en presencia del catalizador, produciendo así condiciones anaeróbicas. El dióxido de carbono, que también se genera, es necesario para el crecimiento de algunos anaerobios y estimula el crecimiento de otros. Un método alternativo para conseguir la anaerobiosis en el tarro consiste en la evacuación y la sustitución. Se evacúa el aire del frasco sellado que contiene las placas de cultivo y se sustituye por una mezcla libre de oxígeno compuesta por un 80 por ciento de nitrógeno, un 10 por ciento de hidrógeno y un 10 por ciento de dióxido de carbono.
Se utilizan procedimientos más sofisticados para aislar microorganismos extremadamente sensibles al oxígeno que no pueden recuperarse utilizando el frasco anaeróbico. Uno de ellos, el método del tubo rodante, consiste en un tubo de ensayo con tapón que contiene gas libre de oxígeno y una fina capa de medio de agar prerreducido en su superficie interior. El medio en el tubo se inocula con un bucle mientras se gira el tubo. Esto produce una pista en espiral en la superficie del agar. El tubo se lava con una corriente de dióxido de carbono para evitar la entrada de aire mientras está abierto durante la inoculación.
El aislador de caja de guantes anaeróbico es otra innovación desarrollada para aislar bacterias anaeróbicas. Se trata esencialmente de una gran cámara de vinilo transparente, con guantes adjuntos, que contiene una mezcla de 80 por ciento de nitrógeno, 10 por ciento de hidrógeno y 10 por ciento de dióxido de carbono. En un extremo de la cámara hay una cerradura con dos trampillas, una que da al exterior y otra al interior de la cámara. Se colocan las muestras en la esclusa, se cierra la escotilla exterior y se evacua el aire de la esclusa y se sustituye por la mezcla de gases. A continuación, se abre la escotilla interior para introducir la muestra en la cámara. Se emplean procedimientos bacteriológicos convencionales para procesar la muestra en la atmósfera sin oxígeno.
Aunque estos complejos sistemas son necesarios para aislar los componentes de la flora anaerobia, los estudios han demostrado que el frasco anaerobio es adecuado para recuperar anaerobios clínicamente significativos. Las bacterias extremadamente sensibles al oxígeno de la microflora aparentemente no están asociadas a procesos infecciosos.
Los procedimientos para el cultivo y la identificación de bacterias anaerobias están bien establecidos (Fig. 17-3). Existe una variedad de medios selectivos y no selectivos para el cultivo de anaerobios. Un medio fiable y no selectivo consiste en agar Brucella complementado con sangre de oveja, hemina, cisteína, carbonato sódico y menadiona. Para identificar a los anaerobios se utilizan los procedimientos bacteriológicos habituales. Se basan en reacciones de tinción de Gram, morfología celular y de las colonias, patrones de sensibilidad a los antibióticos, reacciones de fermentación de carbohidratos y otras pruebas bioquímicas. El análisis de los productos finales metabólicos, especialmente los ácidos orgánicos, proporciona información adicional útil para clasificar estos organismos.