Processing of Clinical Specimens
Bij het verzamelen van monsters van patiënten voor isolatie en identificatie van anaerobe bacteriën die met infecties in verband worden gebracht, moeten voorzorgsmaatregelen worden genomen om lucht uit te sluiten (Fig. 17-3). Materiaal voor anaerobe kweek wordt het best verkregen met een naald en spuit. Tenzij het monster onmiddellijk naar het laboratorium kan worden gestuurd, wordt het in een anaerobe transportbuis met zuurstofvrij kooldioxide of stikstof gedaan. Het monster wordt door de rubberen stop in de transportbuis geïnjecteerd en blijft in het anaerobe milieu van de buis tot het in het bacteriologisch laboratorium wordt verwerkt. Als het monster wordt afgenomen met een swab, wordt alleen een speciaal in de handel verkrijgbaar anaeroob swabtransportsysteem gebruikt.
Figuur 17-3
Isolatie en identificatie van anaëroben.
Specimens moeten vrij zijn van contaminerende bacteriën. Materiaal van plaatsen die normaal steriel zijn, zoals bloed, ruggenmergvloeistof of pleuravocht, vormt geen probleem, mits de gebruikelijke voorzorgsmaatregelen worden genomen om de huid goed te ontsmetten voordat er een gaatje in wordt geprikt om het monster te verkrijgen. Fecale monsters, sputummonsters of vaginale afscheidingen kunnen niet routinematig op pathogene anaërobe organismen worden gekweekt omdat zij gewoonlijk andere anaërobe organismen bevatten. Aspiraten van abcessen of de specifieke infectieplaatsen moeten in deze gevallen worden verkregen om onnodige besmetting met inheemse floracomponenten te voorkomen.
Hoewel er verschillende technieken beschikbaar zijn om een zuurstofvrije omgeving te handhaven tijdens de verwerking van specimens voor anaerobe kweek, is het anaerobe potje het meest gangbaar. Het is een middelgrote glazen of plastic pot met een goed sluitend deksel dat met palladium gecoate aluminiumoxidedeeltjes bevat, die als katalysator fungeren. Het kan op twee manieren worden opgezet. Bij de eenvoudigste methode wordt gebruik gemaakt van een in de handel verkrijgbare enveloppe voor een waterstof- en kooldioxidegenerator (GasPak), die samen met de kweekplaten in de kweekpot wordt geplaatst. De generator wordt geactiveerd met water. Zuurstof in de pot en de gegenereerde waterstof worden in aanwezigheid van de katalysator omgezet in water, waardoor anaërobe omstandigheden ontstaan. Kooldioxide, dat ook wordt gegenereerd, is nodig voor de groei van sommige anaërobe organismen en stimuleert de groei van andere. Een alternatieve methode om anaërobiose in de pot te bereiken bestaat uit evacuatie en vervanging. De lucht wordt uit de afgesloten pot met de kweekplaten geëvacueerd en vervangen door een zuurstofvrij mengsel van 80% stikstof, 10% waterstof en 10% kooldioxide.
Er worden meer gesofisticeerde procedures gebruikt om uiterst zuurstofgevoelige micro-organismen te isoleren die niet met de anaerobe pot kunnen worden gerecupereerd. Een daarvan, de “roll tube”-methode, bestaat uit een afgesloten reageerbuisje met zuurstofvrij gas en een dun laagje agar-medium op de binnenzijde. Het medium in het buisje wordt geënt met een lus terwijl het buisje wordt rondgedraaid. Hierdoor ontstaat een spiraalvormige baan op het agaroppervlak. De buis wordt gespoeld met een stroom kooldioxide om te voorkomen dat lucht binnendringt terwijl zij tijdens de inoculatie open is.
De anaerobe handschoenkastisolator is een andere innovatie die is ontwikkeld voor het isoleren van anaerobe bacteriën. Het is in wezen een grote doorzichtige kamer van vinyl, met daaraan bevestigde handschoenen, die een mengsel van 80% stikstof, 10% waterstof en 10% kooldioxide bevat. Een sluis aan één kant van de kamer is voorzien van twee luiken, waarvan het ene naar buiten en het andere naar de binnenkant van de kamer leidt. De monsters worden in de sluis geplaatst, het buitenste luik wordt gesloten, en de lucht in de sluis wordt afgevoerd en vervangen door het gasmengsel. Het luik aan de binnenkant wordt dan geopend om het monster in de kamer te brengen. Conventionele bacteriologische procedures worden toegepast om het specimen in de zuurstofvrije atmosfeer te verwerken.
Hoewel deze complexe systemen nodig zijn om anaerobe floracomponenten te isoleren, hebben studies aangetoond dat de anaerobe pot adequaat is om klinisch significante anaeroben te recupereren. De uiterst zuurstofgevoelige bacteriën van de microflora worden blijkbaar niet in verband gebracht met infectieuze processen.
De procedures voor het kweken en identificeren van anaerobe bacteriën zijn goed ingeburgerd (Fig. 17-3). Er is een verscheidenheid van selectieve en niet-selectieve media beschikbaar voor het kweken van anaërobe bacteriën. Een betrouwbaar, niet-selectief medium bestaat uit Brucella-agar, aangevuld met schapenbloed, hemine, cysteïne, natriumcarbonaat en menadion. De gebruikelijke bacteriologische procedures worden gebruikt om anaëroben te identificeren. Deze zijn gebaseerd op Gram-kleuringreacties, cel- en koloniemorfologie, antibiotica-gevoeligheidspatronen, koolhydraatfermentatiereacties, en andere biochemische tests. Analyse van metabolische eindproducten, met name organische zuren, levert aanvullende informatie op die nuttig is voor de classificatie van deze organismen.