Processamento de Espécimes Clínicos
Ao recolher amostras de doentes para isolamento e identificação de bactérias anaeróbias associadas a infecções, devem ser tomadas precauções para excluir o ar (Fig. 17-3). Os materiais para cultura anaeróbia são melhor obtidos com uma agulha e seringa. A menos que a amostra possa ser enviada imediatamente para o laboratório, é colocada num tubo de transporte anaeróbico contendo dióxido de carbono ou azoto sem oxigénio. A amostra é injectada através da rolha de borracha no tubo de transporte e permanece no ambiente anaeróbio do tubo até ser processada no laboratório de bacteriologia. Se a amostra for recolhida com um esfregaço, apenas é utilizado um sistema de transporte anaeróbio especial disponível comercialmente.
Figure 17-3
Isolamento e identificação de anaeróbios.
Os espécimes devem estar isentos de bactérias contaminantes. O material de locais normalmente estéreis, tais como sangue, líquido espinal, ou líquido pleural, não coloca qualquer problema desde que sejam tomadas as precauções habituais para descontaminar adequadamente a pele antes de a perfurar para obter o espécime. Espécimes fecais, expectoração ou secreções vaginais não podem ser cultivados rotineiramente para anaeróbios patogénicos, porque normalmente contêm outros organismos anaeróbios. Os aspirados de abcessos ou os locais específicos de infecções devem ser obtidos nestes casos para evitar contaminação indevida com componentes da flora indígena.
Embora estejam disponíveis várias técnicas para manter um ambiente livre de oxigénio durante o processamento das amostras para cultura anaeróbia, o frasco anaeróbio é o mais comum. Trata-se de um frasco de vidro ou plástico de tamanho médio com uma tampa bem ajustada contendo partículas de alumina revestidas de paládio, que servem de catalisador. Pode ser montado por dois métodos. O mais fácil utiliza um envelope gerador de hidrogénio e dióxido de carbono (GasPak) comercialmente disponível que é colocado no frasco juntamente com as placas de cultura. O gerador é activado com água. O oxigénio dentro do frasco e o hidrogénio que é gerado são convertidos em água na presença do catalisador, produzindo assim condições anaeróbias. O dióxido de carbono, que também é gerado, é necessário para o crescimento por alguns anaeróbios e estimula o crescimento de outros. Um método alternativo para alcançar a anaerobiose no frasco consiste na evacuação e substituição. O ar é evacuado do frasco selado contendo as placas de cultura e é substituído por uma mistura livre de oxigénio de 80% de azoto, 10% de hidrogénio, e 10% de dióxido de carbono.
Procedimentos mais sofisticados são utilizados para isolar microrganismos extremamente sensíveis ao oxigénio que não podem ser recuperados utilizando o frasco anaeróbio. Um, o método do tubo de rolo, consiste num tubo de ensaio rolhado contendo gás sem oxigénio e uma fina camada de meio de ágar prereduzido na sua superfície interna. O meio no tubo é inoculado com um laço enquanto o tubo é rodado. Isto produz uma pista em espiral na superfície do ágar. O tubo é enxaguado com um fluxo de dióxido de carbono para evitar a entrada de ar enquanto está aberto durante a inoculação.
O isolador do porta-luvas anaeróbio é outra inovação desenvolvida para isolar bactérias anaeróbias. É essencialmente uma grande câmara de cinil transparente, com luvas anexas, contendo uma mistura de 80% de azoto, 10% de hidrogénio, e 10% de dióxido de carbono. Uma fechadura numa extremidade da câmara está equipada com duas escotilhas, uma que conduz ao exterior e a outra ao interior da câmara. Os espécimes são colocados na eclusa, a escotilha exterior é fechada, e o ar na eclusa é evacuado e substituído com a mistura de gás. A escotilha interior é então aberta para introduzir o espécime na câmara. Procedimentos bacteriológicos convencionais são utilizados para processar a amostra na atmosfera livre de oxigénio.
Embora estes sistemas complexos sejam necessários para isolar componentes da flora anaeróbia, estudos demonstraram que o frasco anaeróbio é adequado para recuperar anaeróbios clinicamente significativos. As bactérias extremamente sensíveis ao oxigénio da microflora aparentemente não estão associadas a processos infecciosos.
Procedimentos de cultivo e identificação de bactérias anaeróbias estão bem estabelecidos (Fig. 17-3). Está disponível uma variedade de meios selectivos e não selectivos para o cultivo de anaeróbios. Um meio fiável e não selectivo consiste em ágar Brucella complementado com sangue de ovelha, hemin, cisteína, carbonato de sódio, e menadione. Os procedimentos bacteriológicos habituais são utilizados para identificar os anaeróbios. Estes são baseados em reacções de coloração Gram, morfologia celular e da colónia, padrões de sensibilidade aos antibióticos, reacções de fermentação de carbohidratos, e outros testes bioquímicos. A análise de produtos finais metabólicos, especialmente ácidos orgânicos, fornece informação adicional útil na classificação destes organismos.