Una volta che un campione di tessuto è stato elaborato da un laboratorio di istologia e trasferito su un vetrino, deve essere colorato in modo appropriato per la valutazione microscopica. Questo perché il tessuto non colorato manca di contrasto: tutti i materiali fissati hanno un indice di rifrazione simile e un colore simile. Se si osservasse al microscopio una sezione di tessuto non colorata, tutto apparirebbe di un colore grigio uniforme e opaco.
Il processo di colorazione fa quindi uso di vari coloranti che colorano particolari componenti cellulari all’interno dei tessuti, in modo da poter distinguere le diverse parti cellulari le une dalle altre.
Haematoxylin and Eosin
Per gli esami di routine, ematossilina ed eosina (H&E) è la macchia di scelta. Questa macchia produce colori diversi per le strutture dei tessuti, che altrimenti sarebbero trasparenti, in modo da poter ottenere una visione dettagliata del tessuto.
Come suggerisce il suo nome, la macchia H&E fa uso di una combinazione di due coloranti – ematossilina ed eosina. Le due macchie sono state introdotte indipendentemente nel 1865 e nel 1875, rispettivamente, da Böhmer e Fischer. Nel 1876, Wissowzky descrisse il loro uso in combinazione come metodo di colorazione dei tessuti per colorare materiali diversi con colori diversi. Ancora oggi, più di un secolo dopo, l’H&E rimane la macchia per tessuti più usata in tutto il mondo.
La scienza dietro l’H&E
Il colorante non produce colore in modo casuale; invece, i coloranti sfruttano le differenze nella chimica del tessuto per colorare differentemente i vari componenti.
Il legame ionico è il tipo più importante di legame che si verifica nelle tecniche di colorazione istologica. Implica l’attrazione elettrostatica tra ioni di carica opposta, uno dei quali è fissato nel tessuto e l’altro nel colorante.
L’ematossilina da sola non è tecnicamente un colorante e non macchia direttamente i tessuti. Ha quindi bisogno di essere usata in combinazione con un “mordente” – un composto che la aiuta a legarsi al tessuto. Il mordente usato è tipicamente un catione metallico, come l’alluminio. L’ematossilina in complesso con sali di alluminio è cationica e agisce come un colorante basico. È caricata positivamente e può reagire con i componenti cellulari basofili caricati negativamente, come gli acidi nucleici nel nucleo. Questi si colorano di blu come risultato.
L’eosina è anionica e agisce come un colorante acido. È caricata negativamente e può reagire con i componenti caricati positivamente e acidofili nel tessuto, come i gruppi amminici nelle proteine nel citoplasma. Questi si colorano di rosa come risultato.
H&E è un utile colorante multiuso che è anche veloce e facile da usare, il che può spiegare perché ha resistito alla prova del tempo. Quali sono i vostri consigli per la colorazione delle sezioni di tessuto?