Une fois qu’un spécimen de tissu a été traité par un laboratoire d’histologie, et transféré sur une lame de verre, il doit être coloré de manière appropriée pour une évaluation microscopique. En effet, les tissus non colorés manquent de contraste : tous les matériaux fixés ont un indice de réfraction similaire et une couleur similaire. Si vous regardiez une section de tissu non colorée au microscope, tout apparaîtrait d’une couleur grise terne uniforme.
Le processus de coloration fait donc appel à divers colorants qui colorent des composants cellulaires particuliers au sein des tissus, afin de pouvoir distinguer les différentes parties cellulaires les unes des autres.
Haematoxyline et éosine
Pour les examens de routine, l’hématoxyline et l’éosine (H&E) est la coloration de choix. Cette coloration produit des couleurs différentes structures tissulaires, qui seraient autrement transparentes, de sorte que vous pouvez obtenir une vue détaillée du tissu.
Comme son nom l’indique, la coloration H&E fait appel à une combinaison de deux colorants – l’hématoxyline et l’éosine. Ces deux colorants ont été introduits indépendamment en 1865 et 1875, respectivement, par Böhmer et Fischer. En 1876, Wissowzky a décrit leur utilisation en combinaison comme une méthode de coloration des tissus pour colorer différents matériaux de différentes couleurs.
Malgré sa simplicité, cette coloration a résisté à l’épreuve du temps. Même aujourd’hui, plus d’un siècle plus tard, H&E reste la coloration des tissus la plus fréquemment utilisée dans le monde.
La science derrière H&E
La coloration ne produit pas de couleur de manière aléatoire ; au contraire, les colorants exploitent les différences dans la chimie du tissu pour colorer de manière différentielle divers composants.
La liaison ionique est le type de liaison le plus important qui se produit dans les techniques de coloration histologique. Elle implique une attraction électrostatique entre des ions de charge opposée, dont l’un est fixé dans le tissu, et le second dans le colorant.
L’hématoxyline seule n’est pas techniquement un colorant, et ne colorera pas directement les tissus. Elle doit donc être utilisée en combinaison avec un « mordant » – un composé qui l’aide à se lier au tissu. Le mordant utilisé est généralement un cation métallique, comme l’aluminium. L’hématoxyline en complexe avec des sels d’aluminium est cationique et agit comme un colorant basique. Elle est chargée positivement et peut réagir avec les composants cellulaires basophiles chargés négativement, comme les acides nucléiques dans le noyau. Ceux-ci se colorent en bleu en conséquence.
L’éosine est anionique et agit comme un colorant acide. Elle est chargée négativement et peut réagir avec les composants acidophiles chargés positivement dans le tissu, tels que les groupes amino des protéines dans le cytoplasme. Ces derniers se colorent en rose en conséquence.
H&E est une coloration polyvalente utile qui est également rapide et facile à utiliser, ce qui peut expliquer pourquoi elle a résisté à l’épreuve du temps. Quels sont vos conseils pour la coloration des coupes de tissus ?